Bộ phim Người Nhện 2 hai năm trôi qua kể từ khi Người Nhện tạm biệt cuộc sống bình thường, từ bỏ cuộc chinh phục cô bạn gái xinh đẹp để dấn thân vào những trách nhiệm lớn lao dành riêng cho mình. Giờ đây, anh trở lại với nhiệm vụ chiến đấu với quái vật Octavius cứu thế giới.

Cuộc sống của Peter Parker (Tobey Maguire) trở nên thật khó khăn sau khi anh có những năng lực đặc biệt của loài nhện. Peter luôn phải cố gắng diễn tốt cả hai vai Siêu nhân và một sinh viên đại học bình thường. Mọi chuyện trở nên rắc rối hơn khi anh quyết định gạt bỏ mọi chuyện để thổ lộ tình yêu với Mary Jane Watson (Kirsten Dunst).